HTI 凝血因子Xa

haemtech Coagulation Factor Xa

因子Xa在凝血酶原
酶中的參與說明了絲氨酸蛋白酶因子Xa在凝血酶原酶復(fù)合物中的參與。膜結(jié)合因子Xa與膜結(jié)合因子Va結(jié)合以形成凝血酶原酶復(fù)合物。該復(fù)合物通過蛋白水解除去凝血酶原的片段1.2（F1.2）部分，有效地將酶原凝血酶原（II）轉(zhuǎn)化為活性絲氨酸蛋白酶凝血酶（IIa）。

HCXA-0060

HCBXA-0061 

HCXA-GD Human gla-Domainless Factor Xa

HCXA-EGR

HCXA-DEGR 

HCXA-BEGR

BCXA-1060

BCXA-EGR 

 BCXA-DEGR

MCXA-5060 鼠標因子Xa

通過內(nèi)在或外在因子Xase復(fù)合物激活酶原因子X產(chǎn)生活性絲氨酸蛋白酶因子Xa（1,2）。因子X的活化需要重鏈的蛋白水解切割，導(dǎo)致活化糖肽的釋放。因子Xa中的重鏈區(qū)含有絲氨酸蛋白酶催化結(jié)構(gòu)域，而如酶原中的輕鏈含有膜結(jié)合結(jié)構(gòu)域。

因子Xa參與凝血酶原酶復(fù)合物，其催化凝血酶原快速轉(zhuǎn)化為凝血酶。凝血酶原酶是由在血漿存在下組裝在細胞表面上的因子Xa（酶）和因子Va（輔因子）組成的酶復(fù)合物。盡管因子Xa可以獨立地催化凝血酶原的活化，但是在*組裝凝血酶原酶復(fù)合物的情況下，該反應(yīng)發(fā)生的速率增加了近300,000倍。在解體凝血酶原酶復(fù)合物后，通過輔因子的失活，因子Va或通過抑制劑如ATIII直接抑制因子Xa來終止因子Xa在體內(nèi)的凝固活性。

近年來，分子生物學(xué)家利用因子Xa對細菌中表達的融合蛋白進行位點特異性切割（9-12）。將Xa因子敏感位點摻入目標重組蛋白和促進純化和/或表達的肽或蛋白質(zhì)之間。通過用因子Xa切割，從表達的雜交種中釋放靶蛋白。然后可以通過親和層析容易地除去因子Xa。

因子Xa通過用從羅素的毒蛇毒液中分離的因子X活化劑活化純化的因子X來制備。通過在苯甲脒 - 瓊脂糖上的色譜法從活化混合物中純化因子Xa，然后進行凝膠過濾（1,3）。還可獲得幾種因子Xa的修飾形式，包括：A）含有三肽氯甲基酮抑制劑EGRck或熒光抑制劑Dansyl-EGRck的活性位點阻斷因子Xa; 和B）人Gla-domainlessβ-因子Xa。該酶以50％（體積/體積）甘油/ H2O供應(yīng)，應(yīng)儲存在-20℃。通過SDS-PAGE分析測定純度，并在因子Xa凝固測定和/或顯色底物測定中測量活性。

除了其在凝血研究中的廣泛應(yīng)用之外，因子Xa還可用于融合蛋白的位點特異性切割。將因子Xa敏感位點摻入目的重組蛋白和促進純化和/或表達的肽或蛋白質(zhì)之間。通過用因子Xa切割，從表達的雜交種中釋放靶蛋白。然后可以通過親和層析容易地除去因子Xa。批次一致性確保每次都可重現(xiàn)的結(jié)果。對于涉及細胞培養(yǎng)的實驗，請與我們聯(lián)系，討論用于細胞培養(yǎng)的定制低內(nèi)毒素批次。

參考

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