內(nèi)切糖苷酶

- 內(nèi)切
糖苷酶從清潔制劑中的糖蛋白 - 高度穩(wěn)定的酶切割完整的聚糖 - 不含甘油，NaCl或其他添加劑，如EDTA。
- 測(cè)試所有酶不存在蛋白水解或意外的糖苷活性

內(nèi)切糖苷酶是用于分析糖蛋白的廣泛使用的酶。這些酶從糖蛋白釋放完整的聚糖，而外切糖苷酶釋放單個(gè)單糖（即唾液酸，半乳糖，β-N-乙?；咸前?，甘露糖等）。

PNGase F通常包含在酶組中，因?yàn)槠淝懈钔暾腘-連接聚糖的活性相似，盡管它實(shí)際上是酰胺酶。它在天冬酰胺氨基酸和N-連接聚糖的殼二糖核心的個(gè)β-N-乙酰葡糖胺糖（GlcNAc）之間切割。Endo F酶和Endo H在和第二GlcNAc之間切割N-連接的聚糖，留下帶電荷的殘基，其有助于增加去糖基化蛋白質(zhì)的溶解度，降低蛋白質(zhì)聚集體沉淀的可能性。PNGase F切割所有N-連接的聚糖，而Endo H和Endo F酶切除特定類型的N-連接聚糖。

酶的這種分類還包括O-糖苷酶，其從絲氨酸或蘇氨酸氨基酸中除去核心1O-連接的聚糖（Galβ1,3GalNAcα）。O-連接的聚糖通常含有在分支和線性連接中與半乳糖連接的另外的單糖，需要使用外切糖苷酶如唾液酸酶和半乳糖苷酶來(lái)除去額外的糖。

內(nèi)切糖苷酶有以下幾個(gè)品牌產(chǎn)品：

（一）qa-bio E-PNG01

PNGase F.

PNGase F從糖蛋白切割N-連接（天冬酰胺連接的）寡糖。

產(chǎn)品編號(hào) - 酶的量
E-PNG01 - 60μLs¹

E -PNG01-20 - 20μLs¹

E -PNG01-200 - 200μls²（以前的E-PNG05）
   ¹包括緩沖液，變性劑和Triton- 
   X²僅含酶

¥ 1,313.38 - ¥ 9,806.55

PNGase F，肽N糖苷酶F，N-糖苷酶，N-聚糖酶

PNGase F從糖蛋白切割N-連接（天冬酰胺連接的）寡糖。該酶將天冬酰胺脫氨基成天冬氨酸，使寡糖保持完整。變性增加了解理速率。大多數(shù)天然蛋白質(zhì)仍然可以*N-去糖基化，但必須增加孵育時(shí)間。酶在反應(yīng)條件（37℃）下保持*活性至少96小時(shí)。PNGase F不會(huì)去除通常在植物糖蛋白上發(fā)現(xiàn)的含有α-（1,3） - 連接的核心巖藻糖的寡糖; 為此目的，使用肽N-糖苷酶A.

有許多替代酶可用于去除N-聚糖，特別是Endo F家族的酶和Endo H.這些酶切割寡糖核心中的兩個(gè)N-乙酰氨基葡萄糖殘基，產(chǎn)生截短的糖在天冬酰胺上殘留一個(gè)N-乙酰氨基葡萄糖殘基的分子。這留下帶電荷的糖，其可以幫助將蛋白質(zhì)保持在溶液中，所述溶液在用PNGase F去糖基化后沉淀，其去除了完整的寡糖。Endo F1切割高甘露糖和一些雜合型N-聚糖。Endo F2將去除雙觸角和高甘露糖（降低40倍速率）。Endo F3釋放出triantennarry和巖藻糖基化的雙觸角N-聚糖。遠(yuǎn)藤H. 去除雜交或高甘露糖聚糖。

來(lái)源 Elizabethkingia miricola（是Chryseobacterium meningosepticum）

EC 3.5.1.52 
PDB 1PGS 
UniProt Q9XBM8

內(nèi)容
PNG酶的F的20mM的Tris-HCl，pH 7.5中

包含20μL和60μL包裝尺寸：
5x反應(yīng)緩沖液7.5 - 250 mM磷酸鈉，pH 7.5 
變性溶液 - 2％SDS，1Mβ-巰基乙醇
Triton X-100 - 15％溶液

比活力 > 25 U / mg

活性 5U / ml

分子量 36,000道爾頓

pH范圍 6-10，適7.5

方案
1.在Eppendorf管中加入高達(dá)200μg的糖蛋白。用去離子水調(diào)節(jié)至35μl終體積。
2.加入10μl5x反應(yīng)緩沖液7.5和2.5μl變性溶液。在100°C加熱5分鐘。
很酷。加入2.5μlTritonX-100并混合。
4.向反應(yīng)中加入2.0μl酶。在37°C孵育3小時(shí)。

特異性切除所有天冬酰胺連接的復(fù)合物，雜交或高甘露糖寡糖，除非α（1-3）核心巖藻糖基化; 天冬酰胺必須在兩個(gè)末端肽結(jié)合，Endo F游離

比活性定義為在37℃，pH7.5下在1分鐘內(nèi)催化從1微摩爾變性的RNase B釋放N-連接的寡糖所需的酶量。通過(guò)SDS-PAGE監(jiān)測(cè)切割（切割的RNase B遷移更快）。

儲(chǔ)存在4°C儲(chǔ)存酶。

（二）ludger

酶（內(nèi)切和外切糖苷酶）包括LudgerZyme™（LZ）產(chǎn)品

內(nèi)切糖苷酶：

從糖蛋白切割聚糖的酶

• PNGase F（肽N糖苷酶F）

  E-PNG01

  PNGase F（QABio）。足以進(jìn)行多達(dá)60次反應(yīng)。

  0.3 U /60μl。試劑盒包括酶加反應(yīng)緩沖液。

  酶學(xué)委員會(huì)編號(hào)：EC 3.5.1.52

• E-PNG05

  PNGase F（QABio）。足以達(dá)到200次反應(yīng)。

  1 U /200μl。僅含酶。

  酶學(xué)委員會(huì)編號(hào)：EC 3.5.1.52

• 重組PNGase F.

  E-rPNG01

  重組PNGase F（QABio）。足以進(jìn)行多達(dá)60次反應(yīng)。

  0.3 U /60μl。試劑盒包括酶加反應(yīng)緩沖液。

  酶學(xué)委員會(huì)編號(hào)：EC 3.5.1.52

• LZ-rPNGaseF-kit *新產(chǎn)品*

  LudgerZyme重組PNGase F試劑盒（New England BioLabs）。足以進(jìn)行多達(dá)150次反應(yīng)。

  150μl。試劑盒包括酶加反應(yīng)緩沖液。

  酶學(xué)委員會(huì)編號(hào)：EC 3.5.1.52

（三）neb 

P0704S

濃度

500,000單位/毫升

尺寸

15,000個(gè)單位

價(jià)格表

$ 180.00

P0704L

濃度

500,000單位/毫升

尺寸

75,000個(gè)單位

價(jià)格表

$ 718.00

PNGase F.

PNGase F是從糖蛋白中去除幾乎所有N-連接的寡糖的有效的酶促方法。PNGase F是酰胺酶，其在高甘露糖，雜合和復(fù)合寡糖的內(nèi)部GlcNAc和天冬酰胺殘基之間切割。 

• 通過(guò)SDS-PAGE和完整的ESI-MS測(cè)定，純度≥95％
• 非重組，沒(méi)有可檢測(cè)的內(nèi)切糖苷酶F1，F(xiàn)2或F3污染
• 儲(chǔ)存在50％甘油中; 適活動(dòng)和穩(wěn)定性長(zhǎng)達(dá)24個(gè)月
• 可在天然或變性條件下使用
• 優(yōu)化糖蛋白的去糖基化; 使N-聚糖核心寡糖保持完整，適合進(jìn)一步分析

（四）promega

PNGase F

Catalog number selected: V4831

PNGase F( 肽N- 糖苷酶F) 是一個(gè)重組糖苷酶，從Elizabethkingia miricola 克隆

• 用于測(cè)定蛋白糖基化狀態(tài)和位置
• 可在N- 連糖蛋白的高甘露糖、雜合和復(fù)合寡糖部分內(nèi)側(cè)的 N- 乙酰葡萄糖胺(GlcNAc) 和天冬酰氨殘基之間進(jìn)行切割。
• 不會(huì)去除常見(jiàn)植物糖蛋白上含有核心α-(1,3)- 巖藻糖連接的寡糖。
• 產(chǎn)品以10u/μl濃度提供

PNGase F, 重組糖苷酶

PNGase F（肽 N-糖苷酶 F）是一個(gè)重組糖苷酶，從 Elizabeth-kingia miricola 克隆，并在大腸桿菌中過(guò)表達(dá)獲得。PNGase F 的分子量為 36kDa,  可以在 N-連糖蛋白的高甘露糖、雜合和復(fù)合寡糖部分內(nèi)側(cè)的 N- 乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨殘基之間進(jìn)行切割（圖1）。PNGase F 不會(huì)去除常見(jiàn)植物糖蛋白上含有核心α-(1,3)- 巖藻糖連接的寡糖。

單位定義：一單位 PNGase F 指在 37℃可以 1 分鐘內(nèi)催化 1nm 變性核糖核酸酶 B（RNase B）去糖基化所需 PNGase F 的量。1 Promega 單位等于 1 IUB 毫單位。

分子量：PNGase F 分子量約為 36kDa 。

物理形態(tài)：PNGase F 溶于 20mM Tris-HCl（pH 7.5，25℃），50mM NaCl和 5mM EDTA緩沖液中，濃度為10,000u/ml。

應(yīng)用：

• 蛋白是否被糖基化的特征

• 確定蛋白的糖基化位點(diǎn)

• 聚糖結(jié)構(gòu)特征

• 蛋白運(yùn)輸

Cleavage specificity of PNGase F on N-Glycans.

Cleavage specificity of PNGase F on N-Glycans.

Recombinant PNGase F deglycosylates multiple substrates.

Recombinant PNGase F deglycosylates multiple substrates.

Schematic illustrating the use of PNGase F and mass spec analysis of N-glycosylation.

Schematic illustrating the use of PNGase F and mass spec analysis of N-glycosylation.